Atma Jaya

Awards
Tagline


ENG | IND
 

Home » Unit » Penelitian

High Efficiency and Regeneration Protocol of Tobacco Transformation Mediated by Agrobacterium tumefaciens LBA4404
High Efficiency and Regeneration Protocol

of Tobacco Transformation Mediated

by Agrobacterium tumefaciens LBA4404



Listya Utami Karmawan* and Angliana

Faculty of Biotechnology, Atma Jaya Catholic University of Indonesia
Jalan Jendral Sudirman No. 51, Jakarta, DKI Jakarta, Indonesia, 12930.
*Correspondence: listya.utami@atmajaya.ac.id


Abstrak
Nicotiana tabacum (tembakau) dikenal sebagai model di bidang bioteknologi tanaman. Saat ini, tembakau transgenik digunakan untuk produksi biofuel. Sifat-sifat baru dapat diintroduksikan dalam tanaman ini melalui prosedur transformasi terfasilitasi Agrobacterium. Transformasi dengan metode cakram daun yang kurang efisien disebabkan oleh rendahnya tingkat regenerasi dan terjadinya nekrosis setelah proses kokultivasi. Dalam studi ini, berbagai teknik-teknik dicoba digabungkan untuk meningkatkan efisiensi transformasi dan regenerasi. Kerapatan sel A. tumefaciens lebih rendah dari 1010 CFU/mL pada kerapatan optik (λ = 600nm) 0.,30 digunakan untuk transformasi. Konsentrasi 250 ppm cefotaxime digunakan untuk meningkatkan penghambatan pertumbuhan A. tumefaciens. Konsentrasi ini tidak menghambat pembentukan tunas tembakau. Regenerasi eksplan pada media seleksi dengan konsentrasi higromisin yang ditingkatkan mulai dari 5 ppm sampai 25 ppm dapat meningkatkan keberhasilan pembentukan tunas transgenik. Efisiensi transformasi terbaik adalah 43.70 ± 3,39% yang diperoleh dari transformasi dengan penambahan 50 µM asetosiringon dan 0.05% Tween®20 dalam tahap inokulasi dibandingkan dengan kontrol, yang hanya 11.67 ± 4.,41%. Tunas yang diduga transgenik telah dikonfirmasi menggunakan primer 35S dan menghasilkan fragmen amplikon dengan panjang yang berbeda (122, 123 dan 449 bp). Hasil ini sesuai dengan uji in silico menggunakan FASTPCR 6.0.165. Sebagai kesimpulan, gabungan protokol ini dapat digunakan sebagai metode alternatif untuk transformasi tembakau.


Kata kunci: Transformasi, A. tumefaciens, tembakau, protokol